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        用什么方法才能正確的選擇標記二抗

        更新時間:2023-08-15      點擊次數:568
          標記二抗能與抗原特異性結合是可以結合的。如果一抗與將抗原*結合,則二抗處不會出現結合反應現象,如果一抗不足以將抗原*結合,則多于抗原會大刀二抗處反應。一抗一般是特異性抗體,二抗一般通用羊抗鼠、羊抗兔之類就可以。但是還需要首先得弄懂抗原、一抗、二抗的相互作用。
         
          標記二抗是能和抗體結合,即抗體的抗體,其主要作用是檢測抗體的存在,放大一抗的信號。二抗是利用抗體是大分子的蛋白質具有抗原性的性質,去免疫異種動物,由異種動物的免疫系統產生的針對于此抗體的免疫球蛋白。用抗AIV H5亞型血凝素單克隆抗體為包被抗體,兔抗AIV IgG為第二抗體。
         
          標記二抗原理:
         
          是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體——聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。
         
          標記二抗選擇要點:
         
          1、種屬來源。主要根據一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可。
         
          2、標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗,以與后面的SP結合反應,而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
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